Как сдать анализы на ВИЧ ПЦР? Анализы на ВИЧ-инфекцию: особенности процедуры и расшифровка результатов Пцр на вич где можно сдать

05.08.2023 | Стресс

Описание

Полимеразную цепную реакцию (Polymerase chain reaction, ПЦР, PCR) изобрёл в 1983 году американский биохимик Кэри Б. Мюллис. В 1993 году за это открытие он был удостоен Нобелевской премии.

Сегодня области применения ПЦР как современного метода молекулярной биологии чрезвычайно широки. Особое место диагностика ПЦР занимает в медицинской практике. И причина этому достаточно проста: полимеразная цепная реакция делает невозможное возможным.

Часто диагностику ПЦР образно описывают как метод, с помощью которого можно находить иглу в стоге сена и затем строить стог из этих игл. "Иглой" является крошечный фрагмент генетического материала клеток (ДНК или РНК).

Таким образом, открытие этого метода - одно из наиболее выдающихся событий в области молекулярной биологии за последние десятилетия. Развитие метода ПЦР позволило медицинской диагностике в целом подняться на качественно новый уровень.

Основы ПЦР

Основа метода - многократное избирательное копирование (амплификация) определённого участка ДНК с целью получения такого количества генетического материала, которого будет достаточно для визуальной детекции. При этом многократно копируется (амплифицируется) только заданный участок ДНК при условии, что он присутствует в исследуемом биоматериале.

Кроме того, исследование помимо простого увеличения количества копий участков ДНК позволяет проводить другие манипуляции с генетическим материалом. Поэтому метод широко применяется в научных исследованиях, биологической и медицинской практике: в диагностике инфекционных и наследственных заболеваний, при выявлении мутаций, генотипировании, установлении отцовства, идентификация личности и др.

ПЦР в диагностике инфекционных болезней

Сегодня ПЦР-диагностика инфекций - один из самых точных, чувствительных и эффективных клинических лабораторных методов. Причём спектр выявляемых возбудителей практически неограничен – была бы разработана тест-система для ПЦР-анализа искомого возбудителя.

Благодаря своей высокой чувствительности, ПЦР позволяет выявить возбудителя даже при его минимальном содержании (то есть в исследуемом биоматериале присутствуют всего несколько молекул его ДНК).

ПЦР выявляет возбудителей инфекционных заболеваний тогда, когда это невозможно сделать другими методами (иммунологическими, культуральными, микроскопическими). Поэтому для целого ряда возбудителей инфекций метод полимеразной цепной реакции стал «золотым стандартом», он проверен временем и апробирован клинически. В современной лабораторной диагностике инфекционных болезней ПЦР - самый чувствительный и специфичный метод прямого обнаружения возбудителей. Это позволяет не только установить этиологию заболевания, но и контролировать течение инфекционного процесса и оценивать эффективность проводимого лечения.

Анализ на ИППП методом ПЦР особенно актуальны при бессимптомном течении инфекционного процесса, вызванного безусловно-патогенными микроорганизмами (Хламидия, качественное определение ДНК ; Микоплазма, качественное определение ДНК ; Возбудитель гонореи, качественное определение ДНК ; Возбудитель трихомоноза, качественное определение ДНК). Например, при хронической гонорее у женщин даже с помощью бактериологического метода часто не удается выявить гонококк, несмотря на имеющиеся симптомы хронического воспалительного процесса в шейке матки или уретре.

Современная ПЦР-диагностика позволяет не только выявить генетический материал возбудителей инфекций, но и определить концентрации их ДНК/РНК (количественный формат исследования). Определение количества возбудителей имеет важное значение в решении вопроса о назначении лечения, особенно если выявлены условно-патогенные микроорганизмы (Микоплазма, количественное определение ДНК ; Типирование уреаплазмы, количественное определение ДНК) .

Одним из основных направлений развития метода ПЦР является разработанный в CMD формат «Мультипрайм», позволяющий выявить в одной пробирке (и одной реакции) нескольких патогенов.

Возбудители инфекций, передающихся иксодовыми клещами

ПЦР-диагностика гепатитов

В настоящее время известно как минимум 5 вирусов, способность которых вызывать поражение печени доказана. Это возбудители гепатита А, В, С, D, Е. В редких случаях гепатит может быть вызван вирусами Эпштейна-Барр и простого герпеса. Способность поражать печень таких агентов как вирусы ТТ и гепатита G сегодня признается не всеми. Все эти вирусы относятся к различным семействам, имеют разные биологические свойства и соответственно, тактика лечения будет тоже значительно отличаться в зависимости от этиологии гепатита.

Учитывая вышеизложенное, весьма актуальной проблемой является адекватная этиологическая диагностика вирусных гепатитов с выявлением конкретного возбудителя. Без использования современных молекулярно-биологических методов это невозможно. Поэтому диагностика гепатитов методом полимеразной цепной реакции - один из самых важнейших шагов в установлении причины заболевания и определения дальнейшей тактики лечения.

ПЦР в диагностике ВИЧ-инфекции

В настоящее время для лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции используется наиболее доступный и одновременно чувствительный подход - обнаружение в крови антител к ВИЧ с помощью иммуноферментного анализа (ИФА) – с последующим подтверждением положительных результатов анализа методом иммуноблоттинга (ИБ). Эффективность выявления лиц, инфицированных ВИЧ, с помощью данного подхода может достигать 99% и более.

Но серологическая диагностика ВИЧ-инфекции имеет ряд ограничений:

Неэффективность в период т.н. «серологического окна» (в первые недели после заражения антитела не выявляются по причине их отсутствия или низкой концентрации).
Антитела к ВИЧ длительное время выявляются у всех детей, рожденных от ВИЧ-инфицированных матерей.
Ложноположительные результаты ИФА из-за присутствия в крови антител к антигенам, сходным с антигенами ВИЧ.
Ложноотрицательные и сомнительные результаты ИФА и иммуноблоттинга (особенно у пациентов в терминальной стадии заболевания).

Поэтому анализы ПЦР при обследовании на ВИЧ-инфекцию сегодня находят всё более широкое применение. Согласно «Методическим рекомендациям о проведении обследования на ВИЧ-инфекцию» (утв. Минздравсоцразвития РФ 06.08.2007) «при наличии эпидемиологических критериев, свидетельствующих о недавнем риске заражения ВИЧ для пациентов и при этом предположительно ложноположительных или ложноотрицательных результатов в ИФА и ИБ, например, при обследовании детей, рожденных от ВИЧ-инфицированных матерей, или пациентов в периоде «серонегативного окна» используется метод ПЦР, при котором обнаруживается генный материал ВИЧ…..». А в случае уже установленного диагноза ВИЧ-инфекции анализ методом ПЦР используется для прогноза, динамического наблюдения и мониторинга проводимой терапии.

Вирус иммунодефицита человека качественное определение ДНК провируса, ПЦР
Вирус иммунодефицита человека количественное определение РНК, ПЦР
Комплексная диагностика: качественное определение РНК вируса гепатита С/ ДНК вируса гепатита В/ РНК вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) 1 и 2 типа

В Центре молекулярной диагностики (CMD) можно сдать ПЦР-анализ на ВИЧ анонимно.

Для большинства женщин и мужчин это венерическое заболевание вызывает наибольшее опасение. По этой причине после случайной интимной связи без барьерной контрацепции, а также при частой смене половых партнеров и после хирургических операций, разумный человек испытывает определенную настороженность. Самый надежный способ внести ясность - это обратиться в клинику и сдать ПЦР анализ на ВИЧ.

Тест по крови можно использовать для определения следующих показателей:

Опровержение/подтверждение наличия ВИЧ в латентный период (в первые недели после заражения антитела в анализах ИФА не выявляются по причине их отсутствия или слишком низкой концентрации).
Определение генотипа ВИЧ-1, ВИЧ-2.
Выявление статуса у детей, которые родились от матерей-носителей (антитела к ВИЧ длительное время выявляются у всех детей, рожденных от ВИЧ-инфицированных женщин. Определение ДНК вируса у детей желательно проводить в возрасте до 48 часов жизни, 1-2 месяца, 3-6 месяцев).
Ложноотрицательные, ложноположительные и сомнительные результаты ИФА тестов.
Диагностика количества ВИЧ и контроль за изменением вирусной нагрузки в динамике (в случае уже установленного диагноза СПИД анализ методом ПЦР используется для прогноза, динамического наблюдения и мониторинга проводимой терапии).

Цена анализа ПЦР на ВИЧ

Методы	Тип ПЦР анализа	Цена
ДНК ВИЧ 1 типа	качественный	2 750
РНК ВИЧ 1 типа в плазме	количественный	8 850
РНК ВИЧ, определение резистентности ВИЧ к ингибиторам протеазы и обратной транскриптазы (заказывается вместе с "РНК вируса ВИЧ в плазме")	-	16 550
РНК ВИЧ, определение резистентности ВИЧ к ингибиторам интегразы (заказывается вместе с "РНК вируса ВИЧ в плазме")	-	16 950
РНК/ДНК HIV-1, определение тропизма ВИЧ	-	16 950

Мультипрайм исследование
РНК гепатита С + ДНК гепатита В + РНК ВИЧ 1 и 2 типа (ультрачувствительный метод)	качественный	3 800

АНАЛИЗ ПЦР НА ВИЧ - КОГДА СДАЮТ, ЗАЧЕМ И В КАКИЕ СРОКИ

ДНК ВИЧ. Диагностика ДНК вируса иммунодефицита человека возможно использовать для раннего определения возможного инфицирования после случая повышенного риска (анализы крови сдаются в сроки, начиная через 10-й день после потенциального инфицирования). Однако для полного исключения инфекции, необходимо в последующем проведение повторного исследования и ИФА диагностики в сроки 4 и 12 недель.
Результаты анализа: ДНК ВИЧ (качественный анализ) - "не обнаружено" или "обнаружено". В последнем случае требуются повторные дополнительные исследования для подтверждения ВИЧ-инфекции. При отрицательном результате, но высоком риске инфицирования, требуется повторное обследование - пересдача крови методом ПЦР или ИФА спустя некоторое время.
РНК ВИЧ. Определение РНК ВИЧ методом ПЦР количественный (так называемая "вирусная нагрузка") - один из показателей для оценки прогноза течения ВИЧ-инфекции и самый ранний показатель эффективности противовирусной терапии. Тест показан для мониторинга течения болезни, решения вопроса о начале терапии, оценки её эффективности.
Исследование РНК ВИЧ методом ПЦР возможно использовать у взрослых при ранней достоверной диагностики возможного инфицирования после эпизода высокого риска (примерно через 7-10 дней после вероятного инфицирования). Присутствие высокого титра РНК ВИЧ в отсутствие антител позволяет диагностировать острую ВИЧ-инфекцию. Однако для уточнения диагноза необходимо проведение повторного исследования и ИФА диагностики в сроки через 1 и 3 месяца.
Сдача ПЦР РНК ВИЧ у беременных с этой инфекцией за 3-4 недели до предполагаемого срока родов показана для решения вопроса о методе родоразрешения (через естественные родовые пути или путём кесарева сечения).
Результаты анализа: РНК ВИЧ HIV 1 типа (количественный анализ) - "не обнаружено" (это в норме).
Резистентность ВИЧ. Анализ на определение резистентности ВИЧ к ингибиторам протеазы и обратной транскриптазы показан ВИЧ-инфицированным при неэффективности проводимой терапии, а также в период острой инфекции перед началом противовирусного лечения. Исследование позволяет определить резистентность ВИЧ к лекартсвенным препаратам. По результатам проведенного анализа инфекционист узнаёт о наличии мутаций устойчивости к ингибиторам протеазы, нуклеозидным и ненуклеозидным ингибиторам обратной транскриптазы, а также информацию по каждой аминокислотной позиции, ассоциированной с мутацией лекарственной устойчивости.
Мультипрайм комплексная диагностика: качественное определение РНК вируса гепатита С / ДНК вируса гепатита В / РНК вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) 1 и 2 типа (ультрачувствительный метод). Анализ позволяет проводить диагностику ВИЧ-инфекции, вирусных гепатитов С и В на ранних сроках. Исследование показано для раннего выявления вирусных гепатитов В и С, ВИЧ 1/2 типа у лиц из группы риска. Выявление ДНК или РНК вирусов свидетельствует об инфицировании.

Сроки готовности данных анализов крови - от 3 до 7 календарных дней. Сдать качественный и количественный анализ ПЦР для диагностики ВИЧ инфекции в Москве можно в нашем медицинском центре. Взятие крови ежедневно, с 10-00, в том числе на

Согласно статистике ВОЗ, за 40 последних лет 25 млн человек умерли от СПИДа. Урон от этой инфекции колоссален. Больше всего зараженных оказалось в странах Африки, откуда и пошла эта инфекция. При ВИЧ становится особо актуальной диагностика заболевания. Правда, средств для лечения ВИЧ еще не создано, но рано начатая терапия может удлинить срок жизни пациента и улучшить ее качество.

Диагностика инфекции ВИЧ

ВИЧ-инфекция определяется на разных этапах следующими методами:

ИФА - иммуноферментный анализ.
Вестерн-блот.
ПЦР - полимеразная цепная реакция.
Экспресс-тесты.

Метод ПЦР был разработан американским биохимиком Кэри Муллисом, который получил за это в 1983 году Нобелевскую премию. Сегодня этот метод в медицине при диагностике всех инфекций считается ведущим в силу своей точности и информативности. ВИЧ в этом плане не исключение.

Суть анализа

Любая живая клетка содержит РНК и ДНК. Эти нуклеиновые кислоты способны к самокопированию и самовоспроизведению. Для каждой инфекции фрагменты ДНК уникальны. В биологических жидкостях эти обломки нуклеиновых кислот циркулируют. Они улавливаются и распознаются специальной аппаратурой - реактором. Это и есть основа метода. Лаборант ведет подсчет этих фрагментов. У ретровируса ВИЧ отслеживают РНК. Даже при единичных копиях вирусных частиц ПЦР может их обнаружить и посчитать.

В качестве исследуемой жидкости чаще всего используется венозная кровь. Специальные компоненты метода вступают в связь с частицами вируса и делают их определяемыми, потому что происходит многократное увеличение найденных фрагментов.

В случае с ВИЧ результат наличия вируса можно получить задолго до того, как появится клиника. Поэтому в силу своей высокой чувствительности ПЦР имеет такое высокое диагностическое значение. Огромный плюс ПЦР заключается в универсальности метода. Инкубационный период инфекции для ПЦР не преграда.

Стоимость исследования

Метод ПЦР - достаточно дорогой. В этом заключается один из его больших минусов. Для его проведения нужна новейшая аппаратура и высокая квалификация врача-лаборанта. В силу сказанного ПЦР-диагностика не выполняется в небольших населенных пунктах. Сдать анализ можно только в специализированных крупных клиниках.

Стоимость определения ДНК ВИЧ в клиниках Москвы от 2 800 рублей, выяснение с помощью ПЦР вирусной нагрузки (РНК вируса в плазме) - от 8 800 рублей, а резистентности ВИЧ к ингибиторам протеазы - от 16 500 рублей. Как видим, цены достаточно высокие. ПЦР можно провести бесплатно в государственных поликлиниках по полису ОМС. Важно, что процедуру можно сделать анонимно. В регистратуре пациент получает номер, по которому он сможет узнать результат. В современных медцентрах имеются личные кабинеты клиентов, куда эти данные будут внесены.

Цели исследования

ПЦР-диагностику на ВИЧ назначают в таких случаях:

Выявление инфекции у ребенка, рожденного от больной матери или носительницы, чтобы определить внутриутробное инфицирование.
Если ИФА дал сомнительные результаты (ПЦР на ВИЧ помогает в этом случае поставить окончательный диагноз).
Для выявления количественного содержания вируса в организме.
При положительном иммуноблотинге - они с ПЦР дополняют друг друга.
Тестирование доноров.
Для ранней диагностики ВИЧ.
Для определения эффективности и резистентности к АРВТ.

Преимущество указанного анализа и в том, что ПЦР на ВИЧ можно проводить даже детям до года.

Исследование чаще выполняют не для первичной диагностики, а уже в процессе лечения. Первичная диагностика - это серологические исследования (при них определяют уровень антител к ВИЧ). При ложноположительном результате его повторяют - это может быть при низкой вирусной нагрузке.

ПЦР диагностирует ВИЧ, когда еще нет к нему антител. Метод ИФА в этом случае не даст ответа.

А ПЦР на ВИЧ будет уже положительным. Но симптомы данного периода ВИЧ неспецифичны. Пациент сначала долго и безуспешно лечится по поводу ОРВИ у терапевта. Следует иметь в виду, что диагноз ВИЧ только на основании ПЦР не ставится, необходимо прохождение и других комплексных тестов. Метод ПЦР служит чаще вспомогательным для сложных случаев.

Подготовка к анализу

Перед тем как сдать ПЦР на ВИЧ, за 2 дня до анализа нужно не употреблять жирную пищу, алкоголь. Также лучше психически и физически не напрягаться. Если пациенту назначен курс иммуностимуляции, его прекращают за 2 недели до анализа.

Кровь лучше сдавать в утренние часы. Исследовать можно и другие биологические жидкости организма (сперму, секрет вагины), но лучшим материалом является кровь. Слюну, пот, мочу и слезы не используют, так как содержание вируса в них минимально.

Плюсы ПЦР при ВИЧ

Достоинствами метода являются крайне малая вероятность ложноположительного результата, универсальность реакции для любых биологических жидкостей организма. Анализ имеет широкий спектр:

Один забор крови можно использовать для выявления разных инфекций.
Методика относится к срочным, результат бывает готов уже на следующий день.
Достоверность составляет от 85 до 98%.
Наличие ВИЧ можно определить через 10-14 дней после заражения (антител при этом сроке еще нет).
Нет возрастных ограничений, проводить можно сразу с момента рождения.

Минусы метода

Недостатки ПЦР заключаются в следующем:

Дороговизна анализа.
Необходимо сложное медицинское оборудование.
Требуется высокая квалификация лаборанта и врача, берущего анализ.
Реакция высокочувствительна, поэтому погрешность может составить 20%.
Может получиться ложноположительный результат, если у пациента есть аутоиммунные процессы, онкология, хронические инфекции.
Необходима особая чистота помещения лаборатории, потому что вирус может попасть в анализ из воздуха. Тогда результат будет неправильным.

Для лабораторий, в которых проводится ПЦР, для улучшения качества диагностики разработаны специальные жесткие меры по системе СанПиНа на внутренний контроль. Кроме того, должны быть соблюдены все правила работы при такой методике:

Требуется строго следить на информацией на пробирках.
Перед забором крови вновь посмотреть и удостовериться в назначении анализа.
Медсестра должна сделать правильную маркировку пробирок.
Врач-лаборант должен правильно провести все манипуляции с биоматериалом, чтобы не допустить перекрестное загрязнение.
Тест-система должна быть отличного качества.

Только при соблюдении всех этих условий погрешность в ответе может составить всего около 2% эпизодов.

Длительность анализа

Многие интересуются, через сколько ПЦР на ВИЧ будет готов. Диагностирование длится не больше 8 часов. Ответ пациент может получить уже на следующий день. Экспресс-тестирование выполняют в течение 2 часов.

Достоверность ПЦР

Несмотря на массу преимуществ, ПЦР не считается идеальным методом диагностирования. К нему обращаются в случае необходимости получения скрининговых тестов на наличие ВИЧ в организме.

Когда берут кровь на анализ?

Через сколько сдавать ПЦР на ВИЧ? Достоверный результат можно получить уже при взятии крови через 4-4 дней после предполагаемого инфицирования. Через 2 недели достоверность на ВИЧ составит 98%, а при сроке 5 дней - 80%. Наличие при ПЦР на результата будет достоверным, но для абсолютно точного результата проводят и ИФА.

Анализ ИФА будет результативным только при наличии антител к вирусу, это время может занимать от 1-3 месяцев до полугода. Так как ИФА дает вероятность выше (98%-99,9%), ПЦР нельзя назвать 100% подтверждающим анализом на наличие ВИЧ-инфекции. Но зато это единственная методика, при которой не нужно ждать появления антител.

При ВИЧ методом ПЦР можно получить сведения об эффективности АРВТ, о стадии заболевания ВИЧ и количестве ВН (количественная оценка нахождения ВИЧ в организме). Это будет говорить о тяжести и степени изменений.

Сдать анализы на ПЦР при ВИЧ нужно и в том случае, если антитела в крови есть, но их наличие не указывает на достоверность ВИЧ-инфицирования клинически.

Сдают анализ не только при заражении и случайной половой связи. Другие поводы:

Планирование беременности.
Предстоящая операция.
Случайная половая связь.
Некоторые профессии требуют сдачи этого анализа для допуска на работу (педагоги, врачи и другой медицинский персонал).
Заключенные.
Больные ТБ.
Работники МЧС и полиции.
Вернувшиеся после отпуска из экзотических стран (при желании удостовериться, что нет инфицирования).
Проститутки.
Иностранные студенты.
Наркоманы.

Также к сдаче анализа на ВИЧ может вынудить определенная симптоматика у пациента:

Резкая потеря веса.
Диарея, длящаяся больше 3 недель.
Беспричинное повышение температуры в течение длительного времени.
Увеличение лимфоузлов.
Невыясненная причина пневмонии, кандидоза и пр.

Расшифровка анализа - прерогатива лечащего врача, а не лаборанта.

ПЦР или ИФА, что лучше?

При РНК вируса выявляется и качественно, и количественно. Этот анализ четко идентифицирует конкретный патоген даже при условии наличия нескольких перекрестно реагируемых. Биологический материал можно использовать даже в засохшем виде. Минус же в высокой чувствительности ПЦР, когда ложноположительный результат может дать и присутствие на инструментах или пробирке даже мизерного количества постороннего ДНК.

Задача и возможность ИФА - определение наличия антител к ретровирусу. Хотя его точность 99%, на ранних стадиях он неприменим.

Качественный анализ на ВИЧ

Проведение качественного ПЦР на ВИЧ определяет присутствие вируса в организме. Результаты в этом случае будут выглядеть следующим образом: положительный, ложноположительный, отрицательный. Но данное исследование не даст сведений о количестве ретровируса. Такой качественный анализ нецелесообразен тогда, когда уже выявлена ВИЧ-инфекция в организме другими способами.

Контролировать результативность лечения качественным ПЦР невозможно.

Количественный анализ на ВИЧ

Проводится уже только ВИЧ-инфицированным с целью подсчета количества копий РНК вируса в биопрепарате.

Цель такого исследования - мониторинг проводимого лечения и выявление резистентности вируса к нему. Противовирусная терапия в таких вычислениях не назначается врачом вслепую, поэтому будет являться более эффективной. Количественный ПЦР на ВИЧ-инфекцию делают гораздо чаще. Отображается этот анализ копией/мл крови.

Какие результаты могут быть выданы:

РНК вируса отсутствует или его очень мало (около 20 копий/мл). Нет достоверности диагноза.
От 20 - до 10 в 6 степени копий/мл - диагноз достоверный.
Более чем 10 в 6 степени копий/мл - большая ВН.

Лаборатории могут выполнять анализ ПЦР на ВИЧ в режиме Real-time. Это подразумевает наблюдение и численную оценку накапливания продуктов ПЦР при автоматической фиксации результатов.

ПЦР на ВИЧ – один из самых достоверных методов постановки этого опасного для здоровья и жизни человека диагноза. Врач может рекомендовать прохождение исследования любому человеку, у которого есть основания подозревать заражение вирусом иммунодефицита человека. Часто пациенты интересуются, в чем суть методики, и каковы ее преимущества и недостатки.

Когда и в какие сроки стоит посетить больницу, чтобы сдать биоматериал на исследование?

ПЦР – диагностический подход, появившийся в клинической медицине благодаря молекулярной биологии. Именно из этой ветки науки исследование пришло в медицину. И стало активно использоваться для постановки различных диагнозов, включая заражение ВИЧ-инфекцией.

Всем известно, что любой живой организм состоит из ДНК и РНК. Полимеразная цепная реакция основана на способности этих нуклеиновых кислот к самовоспроизведению.

Важно помнить, что ПЦР способна определять даже небольшие концентрации вирусных частиц в крови. Происходит это благодаря тому, что в биологической жидкости циркулируют «обломки» нуклеиновых кислот, которые улавливаются и распознаются специальной аппаратурой. Это позволяет поставить верный диагноз даже в том случае, если заражение произошло совсем недавно.

И вирусные частицы еще не успели размножиться в организме пациента. Полученный от пациента биологический материал помещается в специальный реактор. Чаще всего используется венозная кровь.

Специальные компоненты, взаимодействуя с частицами вируса, многократно увеличивают число обнаруженных фрагментов. В итоге фрагменты становятся определяемыми, их можно оценить и сделать выводы о заражении.

Сдают кровь из вены по стандартной методике.

Перед посещением врача не принимают пищу, приходить лучше с утра. Если пациент проходит курс иммуностимуляции, необходимо прервать его за две недели до анализа.

Плюсы и минусы методики

Как и любой другой метод диагностики той или иной болезни, ПЦР-исследование имеет ряд преимуществ и недостатков. К преимуществам метода относят:

низкую вероятность столкнуться с ложноотрицательным или ложноположительным итогом;
возможность использовать для исследования не только кровь, но и другие биологические жидкости, такие как выделения из влагалища, сперма и др. (правда, как отмечают врачи, точность может снижаться);
возможность использовать единожды взятый материал для диагностики сразу нескольких заболеваний;
быстроту получения результатов (если анализ срочный, то итоги получают уже на следующий день);
возможность быстро диагностировать заражение и, соответственно, начать терапию заболевания, улучшив таким образом прогноз;
отсутствие ограничений по возрасту (забор крови из вены можно выполнить даже новорожденному малышу).

Естественно, недостатки у ПЦР тоже есть. К ним относят:

немаленькую цену на исследование, особенно в сравнении с базовыми скрининговыми методами, применяемыми в большинстве больниц;
необходимость наличия сложного оборудования, которое также стоит недешево;
вероятность все же столкнуться с ложными результатами, если нарушена технология выполнения анализа, процесс забора крови или человек страдает от аутоиммунного, опухолевого или хронического инфекционного заболевания.

Естественно, выполнять ПЦР исследование стоит по рекомендации врача.

Доктор сможет оценить в каждом конкретном случае, насколько достоверными будут результаты. Если врач посчитает это необходимым, он вместо ПЦР посоветует своему пациенту другой метод диагностики. Или после получения результатов дополнит план диагностических мероприятия дополнительным пунктом.

Многих пациентов волнует вопрос о том, всем ли людям делается ПЦР-исследование на ВИЧ. На самом деле диагностика обязательна не для всех. Однако есть группы пациентов, которым изредка приходится сдавать кровь для анализа.

Предварительная диагностика

Положительное иммуноглобулиновое исследование

Иммуноблотинг, который дал положительный результат на вирус иммунодефицита человека, обязательно подтверждают с помощью полимеразной цепной реакции. Аналогично поступают, если ПЦР выполнялась первой. Дополнение исследований друг другом почти полностью исключает вероятность ошибок.

Контроль терапии

Пациенты с подтвержденным ВИЧ-статусом довольно регулярно сдают кровь на ПЦР. Это необходимо, чтобы контролировать ход лечения и, если необходимо, корректировать терапию.

Оценка безопасности крови

Любая донорская кровь должна быть исследована с помощью полимеразной цепной реакции.

Это исключает передачу ВИЧ-инфекции через переливание крови.

Оценка статуса новорожденного

Если ребенок рожден от ВИЧ-положительной женщины, ему также обязательно выполняется ПЦР. Это необходимо, чтобы определить статус ребенка и выработать тактику его дальнейшего ведения.

Достоверность исследования

Многих пациентов волнует вопрос о том, насколько достоверна полимеразная цепная реакция в том случае, если планируется диагностировать вирус иммунодефицита человека. Несмотря на то, что ПЦР – это одна из самых современных методик, на все 100% все же нельзя доверять даже ей.

Сегодня ПЦР до сих пор не используется как скрининговый метод именно из-за того, что может давать ложноположительные результаты.

Чтобы избежать этого, врачи рекомендуют правильно готовиться к забору биоматериала, но даже подготовка не всегда помогает. Например, тест может дать положительный результат, если у человека есть злокачественная опухоль в организме. Если он страдает от любой хронической инфекции или, например, аутоиммунного процесса. Даже несмотря на наличие вероятности получить ложноположительный результат, ПЦР используется в практике, как один из самых надежных методов.

Чтобы исключить ошибки, врачи часто рекомендуют своим пациентам сдавать анализ повторно, если результат оказался положительным. Также в ряде случаев рекомендуется дополнительно проводить ИФА реакцию и другие исследования. Выполнение комплекса тестов всегда дает более достоверный результат, чем выполнение только одного исследования.

Для чего можно использовать тест

Далеко не все пациенты знают, для чего конкретно применяется полимеразная цепная реакция в клинической практике врача.

Необходимо обнаружить заболевание в латентном периоде

Вирус иммунодефицита в течение длительного времени может существовать в организме латентно.

ПЦР – единственное исследование, способное указать на присутствие патогена в организме. Даже в том случае, если вирусных частиц еще совсем мало.

Установление генотипа

Сегодня выявлено несколько генотипов ВИЧ-инфекции. Часто важно определить, какой конкретно генотип заразил человека, так как от этого зависит подбор противовирусных препаратов.

Определение именно вируса, а не антител к нему

Одно из преимуществ анализа состоит в том, что с помощью методики можно выявить не антитела к вирусным частицам, а непосредственно сам вирус.

Почему это именно преимущество, интересуются многие пациенты. Дело в том, что если упор делается на обнаружение самого патогена, уменьшается вероятность столкнуться с ложноположительными реакциями из-за схожести различных антител. Как отмечают доктора, во многом именно способность определять сам вирус, а не антитела сделала методику столь эффективной.

В какие сроки сдавать

Часто пациенты интересуются вопросом о том, через сколько можно посетить врача, чтобы сдать биологический материал.

Все зависит от того, что именно планируется определять с помощью методики.

ДНК вируса иммунодефицита человека рекомендуется искать в том случае, если есть подозрение на заражение инфекцией, и необходима ранняя диагностика. В крови ДНК в среднем начинает определяться через десять дней после того, как заражение произошло. Однако анализ рекомендуется подтвердить с помощью ИФА сначала через 4 недели от заражения, а затем через 12 недель.

Если ИФА подтверждает диагноз, статус пациента расценивается, как положительный.

Исследование для определения РНК всегда носит количественный характер. Его рекомендуется проводить в том случае, если положительный статус пациента подтвержден, и начато лечение с помощью противовирусной терапии. Если в организме много РНК, то диагностируется острая фаза заболевания. Если мало – считается, что подавление патогена прошло успешно, и терапия может быть изменена на более щадящую.

Оценка резистентности

Некоторые штаммы ВИЧ проявляют резистентность к препаратам, используемым для их лечения. Чтобы оценить вероятность отсутствия реакции на лечение, также рекомендуется проводить исследование. Ее выполняют, если после назначения терапии улучшение не наступает. Также она рекомендована в острый период инфекционного процесса.

Вирус иммунодефицита человека с каждым годом распространяется в человеческой популяции все активнее. Столкнуться с патологией может любой человек, а потому иногда жизненно необходимо знать, как правильно поставить диагноз.

ПЦР – хороший метод диагностики, если он правильно используется врачом. А пациенту главное – соблюдать рекомендации доктора по подготовке к исследованию, в которых нет ничего сложного.

В последние годы большой популярностью стал пользоваться метод обнаружения генного материала ВИЧ методами репликации (амплификации, размножения) специфических генных последовательностей, часто объединяемых под названием одного из вариантов этого метода «полимеразная цепная реакция» (ПЦР).

В основе метода ПЦР (полимеразная цепная реакция) лежит уникальное свойство НК (как ДНК, так и РНК) - способность к саморепродукции, которая воспроизводится искусственно in vitro. При этом синтезируются только строго специфические фрагменты НК.

Этиологическим фактором ВИЧ-инфекции являются вирусы HIV-1 и HIV-2 (от англ. Human Immunodeficiency Viruses) из семейства Retroviridae. Патогенез ВИЧ-инфекции заключен в инфицировании вирусом клеток с фенотипом CD-4, присущий Т-лимфоцитам хелперам и некоторым другим клеткам организма человека. Прямое цитопатическое воздействие, оказываемое вирусом иммунодефицита на указанные клетки, в конечном итоге приводит к летальному исходу за счет активации оппортунистических инфекций или развития опухолей.

Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции проводится в трёх направлениях:

серологическая диагностика маркеров вируса методами иммуноферментного анализа и иммуноблотинга, заключающаяся в определении в сыворотки крови антигенов и антител против ВИЧ.

определение вирусной НК (провирусной-ДНК или РНК) методом ПЦР, как в крови, так и в клетках крови.

исследование иммунного статуса (количественная оценка CD-4 лимфоцитов), которая наиболее адекватно осуществляется методом проточной цитофлюориметрии.

Особо необходимо отметить значение ПЦР в диагностике ВИЧ-инфекции у детей первого года жизни. Ранняя диагностика ВИЧ-инфекции у детей этого возраста в принципе невозможна без применения ПЦР. Это обусловлено тем, что ребёнок, родившийся от ВИЧ-инфицированной матери обязательно имеет антитела к вирусу иммунодефицита. Различить материнские и собственные антитела к ВИЧ не представляется возможным. У неинфицированного ребёнка данные антитела элиминируются под влиянием собственной иммунной системой к возрасту 6-9 месяцев, хотя в отдельных случаях могут циркулировать до 18 месяцев жизни, но не более этого срока.

Необходимо отметить, что обследование методом ПЦР имеет смысл только при полном отказе от грудного вскармливания ребёнка ВИЧ-позитивной матерью с момента рождения, т.к. риск заражения довольно высок и составляет около 5%.

Таким образом, ПЦР позволяет проводить дифференциальную диагностику ВИЧ-статуса у детей раннего возраста. Так, если имеет место положительный результат ПЦР на НК вируса иммунодефицита в первые 48 часов жизни, то ВИЧ-инфицирование произошло in utero. Если имеет место отрицательный результат ПЦР в первые 48 часов, но становится положительным в возрасте 7 – 14 дней жизни, то инфицирование произошло intrapartum.

В настоящее время ПЦР позволяет осуществлять не только диагностику, но и мониторинг лечения ВИЧ-инфекции путем определения концентрации РНК в плазме, а также выявления резистентных к химиотерапии штаммов вируса иммунодефицита. Определение “вирусной нагрузки” в плазме крови является наилучшим прогностическим критерием течения ВИЧ-инфекции и оценки эффективности антиретровирусной терапии.

Известные модификации ПЦР для диагностики ВИЧ-инфекции достигают чувствительности лишь в 98%, то есть выявляют лишь 98% проб от ВИЧ инфицированных лиц, что существенно ниже, чем при использовании ИФА (до 99,9%). По этой причине они не могут использоваться и как подтверждающие тесты, так как будут давать заведомо больше ложноотрицательных результатов, чем иммуноблот. Методика ПЦР на практике ведет себя как чересчур «чувствительная» к внешним колебаниям, и в неумелых руках, и в недостаточно хорошо оборудованных лабораторных условиях дает немалое количество неспецифических (ложноположительных) реакций. Специфичность ПЦР также зависит от подбора используемых в ней ингредиентов, в особенности, так называемых «праймеров», которые должны имитировать «генные последовательности ВИЧ», но далеко не всегда могут быть точно подобраны. Неудачный подбор может приводить, в частности, к тому, что такие тесты могут с разным успехом выявлять разные субтипы ВИЧ-1, например, выявлять субтип B и не выявлять субтип A и G т.п. Впрочем, разработка этих методик идет быстрыми темпами и не исключено скорое появление более качественных наборов стандартных реактивов. На практике врачи должны учитывать операционные характеристики предлагаемых им диагностических тестов, изначально предполагая, что их полевая (практическая) ценность может быть существенно ниже заявляемой производителями.

Теоретическое преимущество ПЦР состоит в том, что она способна выявлять ВИЧ-инфекцию в инкубационном и раннем клиническом периоде, когда антител еще может не быть. Однако, она пока не всегда может выявлять инфицированных в более позднем периоде инфекции. Это в будущем, возможно, будет иметь значение и при попытке диагностики ВИЧ-инфекции у лиц, получающих противоретровирусную терапию, когда уровень ВИЧ в крови значительно снижается. Совместное использование двух методик, которое могло бы быть выходом из создавшейся ситуации - ИФА и ПЦР, к сожалению, сделает исследования значительно дороже, тем более, если они осуществляются в массовом масштабе.

Обнаружение ВИЧ методом ПЦР в крови возможно в двух вариантах:

Обнаружение ДНК провируса ВИЧ в мононуклеарных клетках периферической крови;

Обнаружение РНК ВИЧ в биологических жидкостях организма (например, в плазме или сыворотке крови).

Сейчас ПЦР на ДНК провируса ВИЧ используется как диагностическая методика для прямой диагностики ВИЧ-инфекции в следующих случаях:

В период серологического "окна". Хотя следует помнить! что чувствительность ПЦР на провирусную ДНК ВИЧ колеблется от 96 до 99%, в связи с чем, несмотря на высокие показатели чувствительности, ПЦР следует проводить или совместно с ИФА или с последующим подтверждением ИФА;

В случае сомнительного результата ИБ;

При обследовании детей, родившихся от ВИЧ-инфицированных матерей. Использование ПЦР в этом случае позволяет сократить сроки постановки диагноза ВИЧ-инфекции с 18 месяцев до 3-6 месяцев.